ISOLAMENTO E APPROCCI DI IMMUNOFLUORESCENZA PER LA LOCALIZZAZIONE CELLULARE DEI GENI COINVOLTI NEL SISTEMA ALCANO HYDROSSILASI (AH) PER LA DEGRADAZIONE DELLA PLASTICA

La scoperta della plastica è una delle più impattanti degli ultimi secoli. L’uso e la diffusione per merito di costi di produzione e versatilità hanno inciso notevolmente sulla vita quotidiana, trovando applicazioni in tantissimi campi, ma, al tempo stesso, questo ha portato, nel corso degli ultimi decenni, ad un costante accumulo di plastica nell’ambiente, al punto che ad oggi si ha presenza di microplastiche nella catena alimentare. Tra le plastiche più diffuse e maggiormente studiate troviamo sicuramente il polietilene (PE). Premesso che la soluzione non può essere solo quella di ridurne l’uso o incentivarne il recupero e il riciclo, questo lavoro di tesi si è incentrato sullo sviluppo di un organismo modello, come la Drosophila melanogaster, che sia in grado di degradare il PE, in particolare di assorbire tutte le peculiarità biochimiche intrinseche di tutti gli insetti capaci di usare il PE come fonte di carbonio. Nello specifico, ci sono alcuni batteri che possiedono un sistema alcano reduttasi (AH) che svolge il ruolo di ossidazione delle lunghe catene carboniose di polietilene. Questo complesso è particolarmente espresso in Pseudomonas aeruginosa, di cui si conoscono quattro geni. L’obiettivo è quello di trasferire questi geni nel genoma di Drosophila, al fine di analizzarne l’espressione e la localizzazione in un contesto cellulare. L’ultima parte riguarda la trasfezione in cellule staminali di Drosophila dei geni e della localizzazione cellulare delle singole proteine, attraverso esperimenti di immunofluorescenza.